Mikotoksyny cz. 3. – co warto wiedzieć?

Testy na obecność mikotoksyn

Kiedy testować?
Testy na obecność mikotoksyn należy rozważyć, gdy istnieją oznaki potencjalnego wpływu na wydajność i zdrowie i nie można ich łatwo wyjaśnić. Jest to szczególnie ważne, gdy skarmiane są spleśniałe pasze lub gdy występują znaczące zmiany w produkcji lub zdrowiu wśród stosunkowo dużej części zwierząt.

Co próbkować?
Próbkuj wszystkie spleśniałe i niespleśniałe pasze, które mogą zawierać mikotoksyny. Zacznij od przetestowania całkowitej mieszanej racji (TMR), gdy są one stosowane do karmienia przeżuwaczy. Pobierać próbki koncentratów, gdy są one stosowane w tradycyjnym żywieniu przeżuwaczy. Jeśli mikotoksyny znajdują się w TMR lub mieszankach zbożowych, należy również zbadać zawarte w nich składniki. Próbki suplementów do zbóż i pasz oddzielnie, jeśli są karmione konwencjonalnie.

Procedury pobierania próbek
Ważne jest, aby pobierać reprezentatywne próbki, ponieważ mikotoksyny są obecne w tak małych ilościach i mogą występować tylko w izolowanych miejscach w pojemniku lub silosie. Zawartość mikotoksyn niekoniecznie jest związana z ilością widocznej pleśni. Ważne jest obchodzenie się z próbkami przed i podczas transportu do laboratorium, ponieważ w tym czasie mogą rozwinąć się niektóre mikotoksyny. Zalecane procedury różnią się w przypadku pasz mokrych i suchych. Mokre pasze obejmują TMR, kiszonkę, sianokiszonkę, ziarno o wysokiej wilgotności i inne pasze o zawartości wilgoci ponad 15%. Suche pasze obejmują gotowe koncentraty, suplementy białkowe, suche zboże, siano i inne produkty o wilgotności poniżej 12%.

• Sugerowana metoda pobierania próbek nr 1 dla pasz suchych
  • Pobieraj od 8 do 12 próbek przy każdym z 3 do 5 karmień.
  • Dobrze wymieszaj podpróbki, uzyskaj półkilogramowy kompozyt i przechowuj w chłodnym, suchym miejscu.
  • Połącz od 3 do 5 kompozytów. Dobrze je wymieszaj i przygotuj  półkilogramową próbkę do przedłożenia do laboratorium.
  • Zachowaj dodatkowy półkilogramowy kompozyt do ewentualnych badań potwierdzających lub do testowania składników odżywczych lub toksycznych innych niż mikotoksyny.

• Sugerowana metoda pobierania próbek nr 2 dla pasz suchych
  • Pobieraj od 12 do 20 próbek strumienia z całej dostawy lub od 12 do 20 próbek z głębokiej sondy z pojemnika lub próbkuj rdzenie od 12 do 20 różnych bel w partii lub koszeniu siana. Uwzględnij próbki sondy lub rdzenia z krawędzi pojemników lub pojemników, w których bardziej prawdopodobne jest pleśń.
  • Umieść suche pod-kompozyty i końcowy kompozyt w podwójnej grubości torebek papierowych lub bawełnianych w celu przechowywania i wysyłki. Przechowuj je w chłodnym, suchym miejscu.

• Sugerowana metoda pobierania próbek mokrych pasz
  • Uzyskaj od 8 do 12 podpróbek mokrych pasz przy każdym z 3 do 5 karmień lub wydań ze składu.
  • Dobrze wymieszaj podpróbki i uzyskaj półtorakilogramową próbkę złożoną.
  • Umieść kompozyty w grubej plastikowej torbie lub podwójnych plastikowych torbach. Pakuj mocno kompozyty i wypieraj nadmiar powietrza przed uszczelnieniem za pomocą dobrej zakładki zamykającej.
  • Przechowuj próbki w zamrażarce do momentu przygotowania końcowego kompozytu.
  • Połącz półtorakilogramowe kompozyty i dobrze je wymieszaj.
  • Przygotuj końcowy kilogramowy kompozyt, aby przekazać go do laboratorium w celu przetestowania mikotoksyn.
  • Zachowaj dodatkowy kilogramowy kompozyt zamrożony do ewentualnej potwierdzonej mikotoksyny lub innych badań.
  • Przetestuj trzeci kompozyt pod kątem wilgoci w gospodarstwie lub w laboratorium testującym paszę, aby określić jego zawartość suchej masy.
  • Końcowe kompozyty przechowuj w zamrażarce do momentu wysłania ich do testowania.
  • Wysyłaj mokre próbki w stanie zamrożonym, zapakowane w izolowaną torbę zawierającą zamrożone opakowanie lodowe.

Pamiętaj, aby odpowiednio zidentyfikować wszystkie próbki za pomocą nieusuwalnego markera. Postępuj zgodnie z instrukcjami laboratorium dotyczącymi identyfikacji próbki, ale każdy pojemnik powinien zazwyczaj zawierać numer próbki, krótki opis paszy i nazwisko osoby, która ją przedłożyła. Do każdej partii próbek należy dołączyć formularz zamówienia z prośbą o badanie przesiewowe pod kątem mikotoksyn, ale nie umieszczaj notatki w torebkach z próbkami, ponieważ mogą stać się nieczytelne z powodu wchłaniania wilgoci.

Oprócz reprezentatywnych próbek opisanych w tej sekcji możesz również zwrócić uwagę na następujące sugestie:
Ponieważ mikotoksyny czasami nie znajdują się w oczywiście spleśniałym materiale, prześlij próbkę pobraną ze spleśniałego miejsca i jego obwodu. Uwzględnij jedną część spleśniałego materiału i cztery części, nie spleśniałe, z jego obwodu, 15 do 25 centymetrów otaczających spleśniały punkt.
Ponieważ większość składników pasz może zawierać mikotoksyny i nie wszystkie je mają w nich pleśń, najlepiej jest pobrać co najmniej wszystkie główne składniki. Przy podejmowaniu decyzji należy wziąć pod uwagę całkowite spożycie mikotoksyn.

Rodzaje testów
Zasadniczo dostępne są dwa główne rodzaje testów mikotoksyn: szybkie testy oraz testy potwierdzające lub ilościowe. Wiele laboratoriów przeprowadzających testy potwierdzające może początkowo przeprowadzić szybkie testy w celu ustalenia, czy próbki są dodatnie i wymagają dalszych badań ilościowych.

Koszty testów mikotoksyn są różne dla obu rodzajów testów. Szybkie testy często wynoszą od około 100 zł. za próbkę. Testy potwierdzające zwykle są droższe za próbkę, w zależności od zastosowanych metod i liczby mikotoksyn zawartych w skanie. Testy potwierdzające z niektórych laboratoriów mogą wymagać od 5 do 10 dni lub więcej od złożenia do momentu otrzymania raportu.

• Szybkie testy
  Szybkie testy obejmują testy immunologiczne (tj. Testy ELISA) i chromatografię cienkowarstwową (TLC). Są one dostępne w wielu komercyjnych i publicznych laboratoriach obsługujących lekarzy weterynarii oraz w kwestiach dotyczących pasz i premiksów. Testy te można również zakupić od dostawców dla takich laboratoriów i czasami są one przeprowadzane w zakładach paszowych, biurach weterynaryjnych oraz w niektórych gospodarstwach, w których są one potrzebne. Opracowano większość szybkich testów przesiewowych w celu wykrycia określonych mikotoksyn. Na przykład zestawy aflatoksyny lub inne dla zearalenonu lub DON (womitoksyny) są dostępne do szybkich lub badań przesiewowych, których odczyt może potrwać od kilku godzin do jednego dnia. Szybkie testy mają charakter bardziej jakościowy niż ilościowy. Na przykład niektóre są bardziej dokładne w zakresie od 0,5 do 1,5 ppm dla mikotoksyn Fusarium, ze względu na substancje zakłócające. Tak więc wyższe lub niższe wartości mogą być podejrzane, dopóki nie zostaną potwierdzone bardziej ilościowymi metodami potwierdzającymi. W niektórych przypadkach wysokie wartości mogą być kilkakrotnie wyłączane.
  
  Skan próbek paszy za pomocą czarnego światła (długofalowe promieniowanie UV) jest czasem uruchamiany jako szybki test na akceptację ziarna lub innych pasz. Ponieważ ten test podlega wielu fałszywie dodatnim i fałszywym negatywom, nie powinien być stosowany jako jedyny czynnik decydujący o tym, czy pasze są bezpieczne do karmienia zwierząt, czy mikotoksyny mogą być zaangażowane w wydajność zwierząt lub problemy zdrowotne. Badanie na światło czarne jest wysoce domniemanym testem na aflatoksyny, ponieważ wskazuje na obecność grzybowego metabolitu i prawdopodobnie innych substancji – nie mikotoksyn. Użycie czarnego światła jest bardziej skuteczne, gdy wszystkie ziarna zostały zmielone, a badającym jest osoba doświadczona, która ma doskonałe widzenie kolorów w celu wykrycia jasnozielono-żółtej fluorescencji wskazującej na możliwe zanieczyszczenie mikotoksynami. Ta fluorescencja może jednak zmniejszyć się lub zniknąć podczas przechowywania. Dlatego zalecane są inne rodzaje szybkich i potwierdzających testów zamiast skanowania w świetle czarnym. Kontynuuj testy światła czarnego za pomocą innych szybkich lub potwierdzających testów.

• Testy potwierdzające
  Testy potwierdzające, które mogą być bardziej ilościowe i prawdopodobnie obejmują więcej mikotoksyn, są zwykle przeprowadzane przy użyciu wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC) lub chromatografii gazowej. Powinny być stosowane, gdy szybkie testy są silnie dodatnie i gdy dostępny jest skan pod kątem większej liczby mikotoksyn niż z szybkich testów. Wybierz renomowane laboratoria, które testują zakres mikotoksyn. Testy są często przeprowadzane tylko dla trzech lub czterech spośród 200 lub więcej mikotoksyn, które mogą istnieć. Skonsultuj się z kilkoma laboratoriami, aby ustalić, jakie mikotoksyny są badane za pomocą zarówno szybkich, jak i potwierdzających testów. Sprawdź, ile jest możliwe mikotoksyn. Podstawowa grupa do testów powinna obejmować aflatoksynę, zearalenon, deoksyniwalenol (DON), T-2 i diacetoksyscipernol (DAS). Jeśli to możliwe, uzyskaj testy HT-2 i ochratoksyny. W pewnym stopniu wyniki dodatnie w preferowanej grupie podstawowej mogą wskazywać na możliwą obecność innych nie testowanych mikotoksyn.

Interpretacja raportów z testów
Należy zauważyć, że wiele laboratoriów podaje wartości na podstawie otrzymanych danych i nie podaje poziomów suchej masy w próbkach, aby ułatwić interpretację. Niektóre nie wskazują, jakiej podstawy używa się w raportowaniu. Dlatego ważne jest, aby wiedzieć, czy wartości są odbierane, czy na innej podstawie. Jeśli nie podano procentu suchej masy lub nie podano poziomów mikotoksyn w stosunku do suchej masy, konieczne jest określenie zawartości suchej masy we wszystkich mokrych próbkach. Następnie poziomy można obliczyć na podstawie suchej masy do interpretacji. Wartości otrzymane lub podane można przekształcić w suchą masę (DM) w następujący sposób:

Interpretacja zawartości mikotoksyn jest komplikowana przez kilka czynników wykraczających poza problemy z zawartością suchej wilgoci i jednostkami stosowanymi w sprawozdaniach. Znaczenie zawartości mikotoksyn w poszczególnych paszach w diecie zależy od tego, ile zużywa się w dawce pokarmowej i od tego, czy ona lub inni mogą być obecni w innych składnikach dawkowania. Poziom obecny w suchej masie całkowitej dawki (TRDM) ma pierwszorzędne znaczenie. Również obecność kilku mikotoksyn na stosunkowo niskim poziomie może być związana z problemami, ponieważ połączenie mikotoksyn może nasilać lub zwiększać szkodliwe działanie zanieczyszczonej paszy. Ponadto istnieje bardzo mało danych z kontrolowanych badań na temat tego, jakie szkodliwe skutki można oczekiwać przy różnych poziomach spożycia mikotoksyn. W dużym stopniu należy polegać na doświadczeniach i badaniach terenowych. Możliwe jest również, że odnotowane szkodliwe skutki mogą być wywołane przez mikotoksyny inne niż te testowane lub faktycznie wynikają z innych czynników, w tym chorób metabolicznych i zakaźnych. Szczególnie brakuje zawartości mikotoksyn związanych z podostrym lub mniej niż dramatycznym wpływem na produkcję, zdrowie i reprodukcję. Istnieje wiele sprzecznych i mylących raportów w literaturze i przewodnikach z powodu tych czynników, a także takich czynników, jak problemy z uzyskaniem reprezentatywnych próbek, właściwego postępowania z próbkami, nieodpowiednich skanów w poszukiwaniu wielu toksyn i dokładności zastosowanych testów. W wielu przypadkach raporty zawierają jedynie poziomy mikotoksyn w ziarnie lub po zastosowaniu pojedynczej paszy, a nie poziomy w oparciu o całkowitą dietę.

Test negatywny bez objawów na zwierzętach sugeruje, że problem mikotoksyn jest wysoce mało prawdopodobny. Jednak negatywny test w obecności objawów prawdopodobnie związanych z mikotoksynami wskazuje na potrzebę dalszej kontroli pasz, dalszych badań podejrzanych i innych pasz w diecie oraz ciągłego poszukiwania innych czynników sprawczych. Jeśli wystąpią drastyczne lub wyraźne skutki, podejrzane karmienie należy przerwać lub karmić w ograniczonych ilościach przynajmniej tymczasowo. Dodatkową mikotoksynę i ewentualnie inne testy należy wykonać na dawce, krwi i kale, próbując znaleźć inne czynniki sprawcze.

W przypadku braku objawów pasze o zawartości mikotoksyn w zakresie od minimalnego poziomu zagrożenia do niższego potencjalnie szkodliwego poziomu należy dokładnie sprawdzić, ponownie pobrać próbki i ponownie przetestować, ponieważ poziomy te wskazują, że występowały warunki sprzyjające wytwarzaniu mikotoksyn. W przypadku umiarkowanego wpływu na wydajność ponownie próbkuj i testuj pasze, a także zmniejsz spożycie dodatnich pasz. W przypadku wyraźnego lub drastycznego zmniejszenia wydajności przerwij podawanie co najmniej tymczasowo na poziomie obaw.

Pasze zawierające mykotoksyny na poziomie potencjalnie szkodliwym lub wyższym należy karmić na ograniczonym poziomie przy braku efektów wydajnościowych i przerwać przynajmniej tymczasowo, jeśli poziom dodatni w przypadku niepokoju w obecności niewyjaśnionych problemów wydajnościowych.

Poziomy niepokoju i potencjalnie szkodliwe skutki podane dla aflatoksyny wymagają szczegółowego wyjaśnienia. Ponieważ aflatoksyna jest czynnikiem rakotwórczym i może przenikać do mleka, gdy jest obecna na pewnych poziomach w diecie, mieszanek paszowych i pasz.